ELISA實(shí)驗(yàn)常見組織樣本處理方法

組織樣本一般是制成組織勻漿，處理方法如下：

1. 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（02mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2. 可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入 5-10ml預(yù)冷PBS(組織與 PBS 的質(zhì)量體積比建議為 1:5，即1g 樣本加入 5ml PBS)進(jìn)行充分研磨（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿），該過程需在冰上進(jìn)行；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù) 2 次）。

3. 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5分鐘，留取上清即可檢測。

4. 如果樣本需要長期保存，請?zhí)砑拥鞍酌敢种苿８鶕?jù)實(shí)驗(yàn)需要，組織勻漿樣本可先定量總蛋白，以便于統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。某些組織樣本如肝臟，腎臟，腦組織會有假陽性反應(yīng)。

樣本保存：

處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4℃保存應(yīng)小于 1 周，-20℃不應(yīng)超過 1 個月，-80℃不應(yīng)超過2個月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。